Question

M

この問題が分かりません。
考え方と解き方を教えてほしいです。
写真の図を参考にして、考えて欲しいです。
よろしくお願いいたします。

添加されたエタノール濃度と実験時間(培養日数)は？
96穴プレートにいくつ播くか？

24時間に１回分裂する。
測定結果のバラツキを考慮して、実験を3回以上繰り返す必要がある。

細胞播種 エタノール                              細胞染色
96穴            添加                            WST-1 法

]                     !                細胞培養                   1         測定分光分析

ーーテ

Answer 1

✨ ベストアンサー ✨

Joker

WST-1アッセイは、細胞増殖を測定する実験方法です。MTTなどと同様です。
特に、細胞毒性を測るために行うことが多い実験です。
今回は、エタノールが、細胞増殖にどういう影響を与えるかを測定するための
実験のようですね。
ですので、考え方としては、
・細胞の培養液のみのもの（ネガティブコントロール）
・細胞のみのもの（ポジティブコントロール）
・エタノールを加えたもの（調べたいサンプル）
の大きく３種類を調べることになると思います。
これらの割り振るは、個人の判断で良いと思いますが、
１、２行をネガティブコントロール
３、４行をポジティブコントロール
残りの12行を、濃度を変えたエタノールを加えたサンプルで
96wellを使うのが良いと思います。
各エタノールの濃度についても、2行ずつ使用すると仮定すれば、
6種類のエタノール濃度の試薬を調整しておく必要があります。

事前準備として、
細胞数を、1.0×10＾5～1.0×10＾6／mLに調製しておきます。
これを、96穴プレートに各100μLずつ加えます。
で、ネガティブコントロール、ポジティブコントロールには水を加え、
他のサンプルには濃度ごとのエタノールを加え、トータルの体積を揃えます。

で、そのあと、24時間から96時間、インキュベートし、
WTS-1を加え、蛍光プレートリーダーで測定する、という流れになります。

培養時間は、24～48時間ぐらいで良いと思いますが、
エタノールでの細胞増殖の阻害と、培養時間との大雑把な関係を調べておくほうが良いと思います。
薄いエタノールでも、長時間培養すると、細胞が全滅しているかもしれませんし、
培養が短かすぎれば、高濃度のエタノールの影響が反映されないかもしれないからです。
細胞周期が24時間ということなので、48時間で良いかもしれませんが、
事前に簡単な実験ができるのであれば、調べておくほうが、適切な培養時間の目安が立てられると思います。

M

とても詳しくありがとうございます。
助かりました。
ありがとうございました。