Question

あゐ

この問題の（4）について、11ー5ー9と11ー9ー5を出すところまではあってたんですが、 図示するところを見てみると回答には、 11ー9ー5の切断パターンしかなく、 11ー5ー9のパターンが書いてないと思うのですが、なぜでしょうか？

163
制限酵素は、2本鎖DNAの特定の配列を認識し、 切断する酵素である。 例えば。 「Smal」
という制限酵素は,図1のように 5-COCGGG-3'」という6塩基配列を認識し、 DNA
素地図)を作製したい。 現在、このDNAについてわかっていることは、以下の4点であ
を切断する。今、 図2に示した 25 kbp の長さをもつ線状2本鎖DNA の DNA 地図 (制限酵
る。
① 制限酵素 および制限酵素によってそれぞれの矢印の位置で切断される。
② 制限酵素入で切断して得られる DNA 断片は 10 15 kbp の2本である。
③制限酵素で切断して得られるDNAは7k khpの2本である。
18
④ ②で切断して得られるDNA 断片は5kg 9kg 11kbpの3本である。
注1)
Thip, tp 対の数で表したDNAの長さを示す。 kbp=1,000bp
および
注2)
DNAの鎖には一定の方向があり,「5」 および 「3′」 と書いて表す。 ここで
は線状2本鎖DNAを模式的に 5'3' と表す 。
(1)
下の塩基配列をもつ線2本 DNA
されるか その位置を図に矢印で示せ.
Socal で処理した場合、どこで切断
5-ACGGTACCOGGGTAGGTGACCCGGGAAATTCTAGGGCCCATGCTTTGACT-
1111
||||||||||||
3-TGCCATGGGCCCATCCACTGGGCCCTTTAAGATCCCGGGTACGAAACTGA-
(2)
図2に示した 25kbp の線状2本鎖DNAを制限酵素とで同時に切断すると何本
kbp, 8kbp/7kbp
のDNA断片が得られるか、また、それぞれの長さは何kbp か。
(3)図2に示した25 kbp の線状2本鎖DNAを制限酵素 ©が切断するパターンは全部で
何通りと考えられるか。
(4) この25kbpの線状2本鎖DNAを制限酵素人と②で同時に切断すると1kbp, 5kbp,
9kbp, 10kbp の4本の DNA 断片が, 制限酵素とで同時に切断すると2kbp 5kbp, 7
Hip 5p の4本の DNA 断片が得られたこのとき、 制限酵素©が切断する位置はどこか。
考えられる2つのパターンを答えよ。 ただし, 解答は図2を参考にして図示せよ。
(弘前大)
図 1
図2
53
5'
CCCGGG.
3'
•GGGCCC
.5'
min
3'
10kbp
A
15kbp
DNA (25kbp)
5'
3'
53
5'
-CCC GGG-
3'
18kbp
7kbp
3'
-GGG CCC-
5'
B

解
163 制限酵素(2)
解答
(1)
5-ACGGTACCOGGGTAGGTGACCCGGGAAATTCTAGGGCCCATGCTTTGACT-3
3-TGCCATGGGCCCATCCACTGGGCCCTTTAAGATCCCGGGTACGAAACTGA-5
(2) 本数 3本 長さ・・・ 7kbp, 8kbp 10kbp
(3)6通り
(4)
A
10
15
11
9
5'
・3' 5'
11
9
5
18
©
C
(1) 制限酵素 Sma I は, 図1のように「5′-CCCGGG-
「3」 の塩基配列でDNAを切断する。 この配列は
DNA 中に2か所ある。
(2) 図2のように, 25kbp の DNAが2か所で切断さ
れて, 10kbp, 8kbp, 7kbp の3つの断片になる。
(3) 一直線上に5kbp, 9kbp, 11kbp の3つの長さ
の断片が並ぶ並び方は3×2×1=6〔通り〕ある。
(4) (3) で考えた6通りの切断パターンのそれぞれに対
して、制限酵素 AとCで同時に作用して, 1kbp,
5kbp, 9kbp, 10kbp の4本のDNA断片が生じ
るのは, 5′側から 9-11-5, 11-5-911-9-5 の場合
である。
制限酵素 BとCで同時に切断して2kbp5
kbp, 7kbp, 11kbp の4本の DNA 断片が生じる
のは, 5-11-911-5-911-9-5の場合である。
これより, 制限酵素が切断する位置は, 11-5-
911-9-5の2つのパターンが考えられる。
164 制限酵素 (3)
7
・3'
7章