生物
高中

請問quantitative PCR(定量PCR)和RT-PCR是不是不相同呢?
因為在網上搜尋quantitative PCR(定量PCR)都是出現RT-PCR
另外,是否可以解釋quantitative PCR(定量PCR)呢?
因為目前在網路上看到的資訊都不太能理解

quai ve Total RNA was isolated using TBlzol reagent (Invitrogen ! fe Technologies, Carlsbad, CA, USA) according to the mar facturer's instructions. The purity and concentration ofthe BRNAw /e Jme spectrophotometer (Maestrogen, Las Vegas, NV, USA), and cDNAs Were synthesized using the miScript II RT kit (Qiagen, Germany) according to the manufacturer's instructions. evaluate the expression of MMP-1, quantitative PCR was performed using the following primers: forward, 5-TCT GIAGGTTGATCCCAGAGAGCAG-3' and reverse, 5-CAGGG TGACACCAGTGACTGCAC-3“ using EvaGreen dye (Solis BioDy Line-Gene K software (Bioer Technology Co,, Ltd., Hangzhou, China). The Ct value for each gene was normalized to B-actin using the following primers: forward, 5“-GGATTCCTATGTGG 3 and reverse, 5/- GGCTCGGGTGAGGAITCTTCATG-3/ ive expression levels Of each gene were calculated using the 2-AAct method, as previously described- RNA萃取&定量PCR 根據製造商的說明,使用 分離總RNA。使用Ma ) Maestrog 對RNA的純度和渡度進行了評價,根據製造商的說明。使用iS (Qiagen) 合成了cDNAs。為了評估MMP-1的表達。使 用以下引物(子)進行了定量PCR : 正向5-TCTGACGTTGATCCCAGAGAGCAG-3'和 向5-CAGGGTGACACCAGTGACTGCAC-3', 使用EvaGreen染料 ss BioDyne) 和Line-GeneK軟件。使用以下引物將每個基因的@ B-actin 向$:-GGATTCCTATGTGGGCGACGA-3', CGCTCGGTGAGGATCTTCATG-3'。 如前所述,使用2-se'法 LuyittogenT 生 人 oo
pcr

解答

Choosen As Best Answer

RT-PCR 對我來說有兩種解釋
一個是 real-time,可以即時定量產物,也稱作 qPCR (quantitative)
另一個是 reverse transcription,將 RNA 反轉錄成 cDNA 再進行放大

圖片裡的看起來像是第二種
但我回答文字中的第一種就好,怕太長

可以做到 "即時" 定量是因為加了特殊的探針,在它的兩側接了 R 和 Q(對不起我不知道這個的中文請容許我用代稱)
機器會偵測 R 發出的信號,可是 R 緊鄰 Q 時信號會被抑制,所以 PCR 開始前沒有信號
在 PCR 進行時,探針會黏合到互補的片段,擋在聚合酶之前,聚合酶會發揮本身外切酶的活性把探針分解掉,R 和 Q 也就分開了
所以隨著 PCR 進行,機器會逐漸偵測到信號,複製出的新股越多信號越強,利用這點就可以從 R 的信號強度來推測出產物濃度

Grings

是說這不是高中生物吧 XD

Emily

謝謝
抱歉!因為不是本科,之前讀的是五專,所以不知道是哪類的~
另外 是否能請你解釋Ct值與2-🔺🔺ct呢

Grings

Ct 是 cycle threshold
達到一定螢光強度所需要的 PCR 循環數
初始濃度越高,Ct 越小

非同時進行的 PCR,Ct 值是沒辦法直接比較的
所以這裡用 β-actin 進行標準化
每個基因的 Ct 值都和 β-actin 的相減
得 ∆Ct

標準化的 ∆Ct 就可以互相比較
不同基因的 ∆Ct 相減就是 ∆∆Ct
實際的濃度差會是指數倍 2^-∆∆Ct
因為 Ct 差 1 = 初始濃度差 2 倍

Grings

話說這裡的定量是用 EvaGreen
是直接測 DNA 的量
比上面的方法簡便,但缺乏專一性

Emily

謝謝仔細又易懂的回答🙇🏻‍♀️

Emily

不知道您方不方便說明“reverse transcription,將 RNA 反轉錄成 cDNA 再進行放大”這個的方法呢?

Grings

其實就只是比一般 PCR 多加了 reverse transcriptase,最後得到的產物是 cDNA

留言
News
【IG直播懶人包】十大科目筆記方法分享
【開學必讀】準高中、準大學生必知二三事
【筆記方法】國文筆記怎麼做,三個超強筆記方法大公開