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( 東京農大)
思考
163 制限酵素(2) 制限酵素は,2本鎖DNAの特定の配列を認識し,切断する酵素
である。例えば,「SmaI」 という制限酵素は,図1のように「5′-CCCGGG-3′」 と
いう6塩基の配列を認識し,DNAを切断する。今、図2に示した25kbp の長さをも
つ線状2本鎖DNAのDNA 地図 (制限酵素地図) を作製したい。 現在、このDNA
についてわかっていることは,以下の4点である。
制限酵素 ④および制限酵素 Bによってそれぞれの矢印の位置で切断される。
(1)
制限酵素入で切断して得られる DNA 断片は10kbpと15kbp の2本である。
制限酵素 Bで切断して得られる DNA 断片は7kbp と 18kbp の2本である。
2
3)
(4)
制限酵素©で切断して得られる DNA 断片は5kbp, 9kbp, 11kbp の3本である。
注1)「bp」,「kbp」 は塩基対の数で表したDNAの長さを示す。 1kbp=1000bp
注2) DNAの鎖には一定の方向があり,「5」および「3」と書いて表す。 ここでは線状
2本鎖DNAを模式的に 5′ 3′ と表す。
大
5
図 1
3'
53
図2
CCCGGG-
3'
・GGG CCC
.5'
CCC GGG.
CCC.
3'
5'
・GGG
10kbp
A
15kbp
DNA (25kbp)
3'
18kbp
7kbp
B
(1)下の塩基配列をもつ線状2本鎖DNAを制限酵素 SmaIで処理した場合,どこ
で切断されるか。 その位置を図に矢印で示せ。
5'-ACGGTACCCGGGTAGGTGACCCGGGAAATTCTAGGGCCCATGCTTTGACT-3
|||||
3-TGCCATGGGCCCATCCACTGGGCCCTTTAAGATCCCGGGTACGAAACTGA-5
(2) 図2に示した 25kbp の線状2本鎖DNAを制限酵素 AとBで同時に切断すると
何本の DNA 断片が得られるか。 また、それぞれの長さは何 kbp か。
(3) 図2に示した 25kbp の線状2本鎖DNAを制限酵素が切断するパターンは全
一部で何通りと考えられるか。
(4) この25kbp の線状2本鎖DNA を制限酵素④とCで同時に切断すると1kbp
kbp, 9kbp, 10kbp の4本のDNA断片が、 制限酵素⑧ と ©で同時に切断す
と2kbp, 5kbp, 7kbp, 11kbp の4本の DNA 断片が得られた。このとき
限酵素が切断する位置はどこか。 考えられる2つのパターンを答えよ。 ただし
解答は図2を参考にして図示せよ。
(弘前大