ページ1:

เทคโนโลยีทาง DNA
พันธุวิศวกรรมและโคลนเป็น
พันธุวิศวกรรม >> เป็นเทคนิค การตัดต่อและถ่ายขึ้นที่ต้องการเข้าสู่สิ่งมีชีวิต
(genetic engineering
สิ่งมีชีวิตดัดแปรพันธุกรรม 2 คือ การตัดต่อขึ้นที่ทำให้ได้สิ่งมีชีวิตที่มีสมบัติตามต้องการหรือมีลักษณะเปลี่ยนแปลงไป
(GMO ; genetically modified organism)
DNA สายผสม/คอมบิแนนท์
(Recombinant DNA
กเดิม
คือ การตัดต่อ DNA ของสิ่งมีชีวิตหนึ่ง แล้วไปเชื่อมกับ DNA ของสิ่งมีชีวิตหนึ่ง
เอนไซม์ตัดจำเพาะ 2 หน้า ตัดสาย DNA ในตำแหน่งที่มีลำดับเบส เพาะ
restriction enzyme,
เอนไซดีเอ็นเอไอเอส 2 ทำหน้าที่เชื่อมต่อสาย DNA
(DNA ligase enzyme
ปลายเหนียว คือ ปลายสาย DNA ที่มีสาย nucleotide สายเดี่ยวยื่นออกมา
stick end
ขนสาย DMA
เรียกว่า บริจา
ปลาย 2) คือ ปลายสาย DNA ที่ไม่มีสาย nucleotide สายเดี่ยวยื่นออกมา
(blunt end)
restriction
enzyme
9 ตำแหน่งตัดสาย DNA
EeoRI
BamHI
HindIII
SmaI
PstI
5 G-A-A-T-T-C3
3C-T-T-A-AG 5'
5 G-G-A-T-C-C 3′
3C-C-T-A-GG 5'
5A A-G-C-T-T s
ST-T-C-G-ATA5'
5° C - C - C - 6 -6 -6 3
3 G - G - G = C-C-C 5'
s'C - T-G-C-A YG
36A-C-G-T-C 5'
ผลผลิตที่ได้
5G A-A-T-T-C³°
3' C - T-T-A- A 65'
5'6 G-A-T-C - C 3'
C-C-T-A-G 65
5A A-G-C-T-T s
ST-T-C-G-AA 5
50-0-06-6-63
36.
-
-
G | C - C - C 5’
5C-T-G-C-A G3
G
A-C-G-T-C5'
ปลายของ DNA
stick end
stick end
Stick end
blunt end
stick end

ページ2:

น.2
ขั้นตอนการสร้าง Recombinant DNA
1) เขา DNA ตัดด้วย restriction enzyme
1) นำ DNA molecule อื่นที่ถูกตัดมาเข้าด้วยกัน ที่เป็นชนิดเดียวกัน
3) นำ DNA ทั้งสองมาเชื่อมกัน ด้วย DNA ligase enzyme
m โคลน
คือ การเพิ่มจำนวน DNA เพื่อให้ได้สิ่งมีชีวิตเดียวกัน
"
การโคลนเงินโดยอาศัยพลาสชิด ของ Bacteria ขั้นตอน
โคลน DNA or การโคลน gene
1) แยก plasmid ออกจาก Bacteria cell แล้วตัดด้วย restriction
enzyme
27 DNA gene
ที่ต้องการมาตัดด้วย restriction
enzyme
พอเรียงกัน
3) นำชิ้นส่วน DNA ที่มี gene ที่ต้องการ มาเชื่อมกับ plasmid และได้เป็น Recombinant DNA
4) นำ Recombinant DNA ใส่กลับเข้าไปใน Bacteria, cel
5) นำ Bacteria cd ไปเลี้ยงเพื่อเพิ่มจำนวน
การเพิ่มจำนวน Gene or DNA โดยเทคนิค PCR ( Polymerase chain reaction)
เทคนิค PCR >> คือ การเพิ่มชิ้นส่วน DNA ในหลอดทดลอง โดยอาศัยเครื่องเทอร์มอลไปเคล
sa
สิ่งที่ใช้ในการทำ PCR
17 DNA แ แบบ
1) ไพรเมอร์ (primer) DNA สายสั้นๆ กำหนดจุดนั้นในการสร้าง line DNA
3) nucleotide 480 (ACGT)
4)
enzyme
DNA polymerase do nucleotide ให้เป็นสาย DNA
ขั้นตอนการทำ PCB
1. การแลก DNA เป็นศาลเดี่ยว (denaturation) ใช้อุณหภูมิ : 90-95
4. การจับของ primer with DNA แม่แบบ (annealling of primer)
3. m สร้าง DNA new line (primer extention) ใช้อุณหภูมิ : 30-35
How to ตาจน mdecule DNA จากการทำ PCR
จน molecule DNA =
2 ( n - น.
- น.รอมของปฏิกิริยา)
Bacteria cell
O
chromosome plasmid
Ex: ถ้าเริ่มต้นปฏิกิริยา PCR จาก DNA 1 molecule เมื่อสิ้นสุดปฏิกิริยา รอบที่ 5 จะได้ DNA ที่ molecule
2 = 32
Ex: ถ้าเริ่มต้นปฏิกิริยา PCR จาก DNA 8 molecule เมื่อสิ้นสุดปฏิกิริยา รอบที่ 5 จะได้ DNA A molecule
=
2x8 = 128
16x8
cell generosam
Recombinant
DNA
4
Bacteria cell
DNA
gene'
ต้องการ